Morphometry of bovine blastocysts produced in vitro in culture media with antioxidants cysteamine or oily extract of Lippia origanoides / [Morfometria de blastocistos bovinos produzidos in vitro em meio de cultura com antioxidantes cisteamina ou extrato oleoso de Lippia origanoides]

This study aimed to evaluate the ultrastructural morphometry of bovine embryos produced in vitro grown at different concentrations of antioxidants. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were assigned into five treatments. T1) without the addition of any antioxidants (negative control); T2) addition of 50µM/mL cysteamine; and T3, T4 and T5) adding 2.5µg/mL, 5.0µg/mL or 10.0µg/mL of the antioxidants derived from the oily extract from Lippia origanoides, respectively. On D7 of culture, the embryos in the blastocyst stage were fixed and prepared for electron transmission microscopy. These were evaluated for the proportion of cytoplasm-to-nucleus, cytoplasm-to-mitochondria, cytoplasm-to-vacuoles, cytoplasm-to-autophagic vacuoles and cytoplasm-to-lipid droplets. Blastocysts cultured in media containing oily extract of Lippia origanoides presented morphological characteristics such as high cell:mitochondria ratio and low cell:vacuoles and cell:autophagic vacuole ratio, possibly been morphological indicators of embryonic quality. Inner cell mass (ICM) from blastocysts cultured in media without any antioxidants had the highest cell:vacuole ratio. Similar results were found in the trophectoderm (TE) cells of blastocysts from treatment 2. Embryo culture media supplemented with antioxidants derived from Lippia origanoides oil produced embryos with a higher cytoplasmic proportion of organelles, such as mitochondria. Also, treatments without any antioxidants or with the addition of cysteamine presented cytoplasmic vacuolization, a characteristic related to production of poor-quality embryos.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a morfometria ultraestrutural de embriões bovinos produzidos in vitro e cultivados em diferentes concentrações de antioxidantes. Após a maturação e a fertilização in vitro, os possíveis zigotos foram divididos em cinco tratamentos: T1) sem adição de antioxidantes (controle negativo); T2) adição de 50µM/mL de cisteamina; e T3, T4 e T5) adição de 2,5µg/mL, 5,0µg/mL ou 10,0µg/mL dos antioxidantes derivados do extrato oleoso de Lippia origanoides, respectivamente. No D7 de cultivo, os embriões em estágio de blastocisto foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de transmissão. Estes foram avaliados para a proporção entre citoplasma e núcleo, citoplasma e mitocôndria, citoplasma e vacúolos, citoplasma e vacúolos autofágicos e citoplasma e gotículas lipídicas. Blastocistos cultivados em meio contendo extrato oleoso de Lippia origanoides apresentaram características morfológicas como alta relação célula:mitocôndria e baixa relação célula:vacúolos e célula:vacúolo autofágico, possíveis indicadores morfológicos de qualidade embrionária. A massa celular interna (MCI) de blastocistos cultivados em meio sem quaisquer antioxidantes teve a maior razão célula:vacúolo. Resultados semelhantes foram encontrados nas células do trofectoderma (TE) de blastocistos do tratamento 2. Portanto, o meio de cultivo embrionário suplementado com antioxidantes derivados do óleo de Lippia origanoides produziu embriões com maior proporção citoplasmática de organelas, como mitocôndrias. Além disso, tratamentos sem antioxidantes ou com adição de cisteamina apresentaram vacuolização citoplasmática, característica relacionada à produção de embriões de baixa qualidade.(AU)

Pregnancy rates and luteal phase characteristics of bovine embryo recipients treated with flunixin meglumine / Taxas de prenhez e características da fase lútea de receptoras de embriões tratadas com flunixina meglumina em bovinos

The aim of this study was to evaluate the effects of flunixin meglumine administration on pregnancy rates and luteal phase characteristics in bovine embryo recipients at the moment of embryo transfer. In experiment 1, in vitro produced embryos were transferred to 184 females divided as control and treated group (recipients treated with 1.1mg/kg flunixin meglumine). In experiment 2, 22 females were divided as control group; group 2 (animals submitted to a reproductive tract manipulation similar to an embryo transfer on the 7th day after estrous); and group 3 (females submitted to a manipulation and treatment with 1.1mg/kg flunixin meglumine). In experiment 1 no difference was observed between control and treated groups (40.2% and 44.6%, respectively) for pregnancy rates. In experiment 2 no difference was observed on the length of luteal phase between groups, however, animals in group 2 presented lower plasma progesterone concentrations than the control group and group 3. Therefore, we concluded that although the administration of flunixin meglumine at the moment of embryo transfer inhibited the reduction plasma progesterone concentrations, it was not effective in increasing pregnancy rates of bovine recipients.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração de flunixina meglumina sobre as taxas de prenhez e características da fase lútea da receptora no momento da transferência de embriões em bovinos. No experimento 1, embriões produzidos in vitro foram transferidos para 184 fêmeas, divididas em grupos controle e tratado (tratados com 1,1mg/kg de flunixina meglumina). No experimento 2, 22 fêmeas foram divididas em grupo controle (n=7); grupo 2 (n=8; animais submetidos à manipulação do trato reprodutivo semelhante à transferência de embriões no sétimo dia pós-cio); e grupo 3 (n=7; fêmeas submetidas à manipulação e ao tratamento com 1,1mg/kg de flunixina meglumina). No experimento 1, não foi observada diferença nos grupos controle e tratado (40,2% e 44,6%, respectivamente) para as taxas de prenhez. No experimento 2, não houve diferença na extensão da fase lútea entre os grupos, entretanto os animais do grupo 2 apresentaram concentrações plasmáticas de progesterona mais baixas que o grupo controle e o grupo 3. Portanto, conclui-se que a administração de flunixina meglumina no momento da transferência de embriões inibiu a redução das concentrações plasmáticas de progesterona, no entanto não foi eficaz para aumentar as taxas de prenhez de receptoras em bovinos.(AU)

Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Effect of Rolipram on in vitro maturation, gene expression and embryonic development in bovines / Efeito de rolipram na maturação in vitro, expressão gênica e desenvolvimento embrionário em bovinos

The aim of this work was to evaluate the effect of the Rolipram during the maturation of bovine oocytes and gene expression of embryos produced in vitro. Bovine ovaries were collected in slaughterhouse. The COCs were selected and divided into 5 groups: Control 0 time; Control: IVM for 24 hours; Rolipram treatments with IVM blocking for 24 hours in maturation medium containing (100, 150 and 200µM). After 24 hours all groups were reseated in IVM for another 24 hours. Subsequently COCs were subjected to the same IVM system and fertilized, being checked for cleavage post fertilization and for blastocyst. In addition, performed expression of the following genes: Mater, BMP15 and Bax. No difference was found in gene expression. Of oocytes evaluated shortly after follicular aspiration, 79.00% were in GV, GVBD, MI, while 13.40%, were in MII and 7.60%, D/NI. Significant difference was observed in different concentrations (T100, T200 and T150µM) in oocytes that have reached the MII phase compared to control treatments (P= 0.003). Differences were observed in cleavage rate (P< 0.05) between T150 and T200 when compared to the C/24 Group. A high difference was observed on blastocyst rate (P< 0.001) among treatments compared to the control group.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do rolipram durante a maturação de oócitos bovinos, expressão gênica e embriões produzidos in vitro. Os ovários bovinos foram coletados no matadouro. Os COCs foram selecionados e divididos em cinco grupos: controle 0 tempo; controle: MIV por 24 horas; tratamentos rolipram com bloqueio MIV por 24 horas em meio de maturação contendo 100, 150 e 200µM. Após 24 horas, todos os grupos foram recolocados em MIV por mais 24 horas. Subsequentemente COCs foram submetidos ao mesmo sistema MIV e fertilizados, sendo avaliada a taxa de clivagem e de blastocisto, além da expressão dos seguintes genes: Mater, BMP15 e Bax. Nenhuma diferença foi observada na expressão gênica. Dos oócitos avaliados logo após a aspiração folicular, 79,0% estavam em GV, GVBD, MI, enquanto 13,40% estavam em MII, e 7,60% em D/NI. A diferença significativa foi observada em diferentes concentrações (T100, T200 e T150µM) em oócitos que atingiram a fase MII em comparação aos tratamentos de controle (P=0,3). Diferenças foram observadas nas taxas de clivagem (P<0,5) entre T150 e T200 quando comparadas com as taxas do grupo C/24. Uma grande diferença foi observada na taxa de blastocisto (P<0,1) entre os tratamentos em relação ao grupo controle.(AU)

Effect of somatotropin on survival and diameter of bovine preantral follicles / Efeito da somatotropina na sobrevivência e no diâmetro de folículos pré-antrais de bovinos

The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)

Avaliação "in vitro" do efeito do ozônio em Staphylococcus aureus isolados de leite de vacas com mastite / Evaluation "in vitro" of the ozone effect in Staphylococcus aureus isolated from cow milk with mastitis

O ozônio possui efeito bactericida, fungicida e viricida e tem sido usado para o trat amento de diversas enfermidades. O objetivo do trabalho, foi avaliar a ação bactericida do ozônio, in vitro, contra Staphylococcus aureus isolados de vacas leiteiras. O experimento foi realizado com vacas, produtoras de leite, uma fazenda do Sul da Bahia. Foram avaliadas vacas que foram positivas para mastite, depois de ter sido feito o teste California Mastitis Test. No laboratório realizou-se os testes de coloração de gram, catalase e coagulase, acetoína, maltose e trealose e foi realizada a diluição seriada das amostras em solução salina. Foi realizada também a ozonização das colônias na concentração de 40 microgramas por mililitro por 5 minutos. Nas análises após a ozonização, observou-se uma significativa diminuição do crescimento de colônias.

Endometrial prostaglandin F2α in vitro production and its modulation regarding dominant follicle position in cattle / Produção in vitro de PGF F2α endometrial e sua modulação referente ao folículo dominante em bovinos

Prostaglandin F2α (PGF2α) determines luteolysis in cattle, and the ability to manipulate its endogenous synthesis is indispensible for large-scale animal breeding. Estradiol (E2) and progesterone (P4) modulate several molecular pathways in endometrial cells, including the synthesis of PGF2α; however, its specific mechanisms are still not totally known. This study investigated the production in vitro and possible modulation of endometrial PGF2α due to a local effect of endogenous E2 in the ipsilateral uterine horn (UH) containing the dominant follicle (DF) or from P4 in ipsilateral horn containing the corpus luteum (CL). The PGF2α stimulators oxytocin (OT) and phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu) were incubated with endometrial explants, and PGF2α content was measured. For that, cycling cows were synchronized, the development of DF and CL was examined by ultrasonography and on the seventh day of the estrous cycle, endometrial explants were collected and cultured in medium supplemented with 10-6 M PDBu or 10-6 M OT or non-supplemented. Media samples were collected immediately after treatment and 60 min later. Radioimmunoassay showed that the PGF2α content of the UH ipsilateral to the DF was 49% less than that of the contralateral UH (8.22 ± 0.95 vs. 12.24 ± 0.95 pg/mL/mg tissue, respectively; P < 0.01). However, the PGF2α levels did not differ between the UHs as a function of the CL position (9.46 ± 0.95 vs. 11 ± 0.95 pg/mL/mg; P > 0.05). The cellular stimulators promoted an increase in PGF2α synthesis (P < 0.02), and the effects differed among the animals (P < 0.04). The PGF2a production was higher in the explants treated with PDBu rather than OT (13.68 ± 1.16 vs. 10.01 ± 1.16 pg/mL/mg tissue, respectively; P < 0.05). In conclusion, PGF2α synthesis is modulated by the presence of the DF (local E2) but not the CL (local P4), and both PDBu and OT stimulated PGF2a synthesis.(AU)

A prostaglandina F2α (PGF2α) determina a luteólise em bovinos. A capacidade de manipular sua síntese endógena é indispensável para a produção animal em grande escala. O estradiol (E2) e a progesterona (P4) modulam diversas vias moleculares das células endometriais, incluindo a síntese de PGF2α; no entanto, pouco se sabe sobre seus mecanismos específicos. Este trabalho investigou a produção in vitro e a possível modulação da PGF2α endometrial devido a um efeito local do E2 endógeno no corno uterino ipsilateral ao folículo dominante (FD) ou da P4 no corno ipsilateral ao corpo lúteo (CL). Os estimuladores de PGF2α oxitocina (OT) e 12,23-dibutirato de forbol (PDBu) foram incubados com explantes endometriais, e o conteúdo de PGF2α foi mensurado. Para tal, vacas cíclicas foram sincronizadas, o desenvolvimento de FD e CL foi examinado por ultrassonografia, e no 17º dia do ciclo estral os explantes endometriais foram coletados e cultivados em meio ou suplementados com PDBu 10-6M ou 10-6M OT. As amostras de meio foram coletadas imediatamente após o tratamento e sessenta minutos depois. O radioimunoensaio mostrou que o conteúdo de PGF2α do corno ipsilateral ao FD foi 49% menor que o do corno contralateral (8,22 ± 0,95 vs. 12,24 ± 0,95 pg/mL/mg de tecido, respectivamente, P < 0,01). No entanto, os níveis de PGF2α não diferiram entre os cornos em função da posição do CL (9,46 ± 0,95 versus 11 ± 0,95 pg/mL/mg; P > 0,05). Os estimuladores celulares promoveram um aumento na síntese de PGF2α (P < 0,02), e os efeitos diferiram entre os animais (P < 0,04). A produção de PGF2α foi maior nos explantes tratados com PDBu em comparação à OT (13,68 ± 1,16 versus 10,01 ± 1,16 pg/mL/mg de tecido, respectivamente, P < 0,05). A conclusão obtida foi que a síntese de PGF2α é: modulada pela presença do FD (E2 local), mas não do CL (P4 local); e estimulada por PDBu e OT.(AU)

Efeito da adição do ácido linoleico conjugado no cultivo in vitro de embriões F1 Holandês x Zebu na sobrevivência pós-vitrificação / Effect of conjugated linoleic acid addition in in vitro culture medium in F1 Holstein X Zebu embryo survival post vitrification

Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P<0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P<0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.(AU)

The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P <0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P<0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.(AU)

Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Prevalence and in vitro susceptibility of methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) from skin and nostrils of dogs with superficial pyoderma / Prevalência e suscetibilidade in vitro de Staphylococcus pseudintermedius resistente à meticilina (MRSP) oriundos de pele e narinas de cães com piodermite superficial

In order to assess the prevalence of Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius from skin and nostrils of dogs with pyoderma, to determine its in vitro susceptibility, and to correlate these data with the presence of the mecA gene, 43 dogs were selected. Samples were collected from secretion of their skin lesions and right nostril, cultured, and analyzed for phenotypic and genotypic characteristics of the bacteria studied. In 62 samples (91%) the microorganism was classified as S. pseudintermedius. The rate of resistance against antibiotics ranged from 7% (amikacin; 4/62) to 77% (sulfamethoxazole + trimethoprim; 48/62). Resistance against oxacillin was found in 34% of the samples (21/62). Twenty-five samples (37%) were strains that carried the mecA gene. A significant correlation (P<0.01) was found between presence of the mecA gene and oxacillin resistance. Seventeen dogs were mecA gene carriers, and 8 (47%) of them had the gene in the skin lesions and nostril. A significant correlation (P<0.01) was also observed between the presence of mecA gene in the skin lesions and nostrils. Oxacillin resistance in vitro can be safely used to indicate the presence of mecA gene in MRSP samples. The nostrils can be a reservoir of MRSP in dogs.(AU)

Para acessar a prevalência de MRSP na pele e nas narinas de cães com piodermite superficial, determinar a suscetibilidade in vitro, e correlacionar estes dados com a presença do gene mecA, foram selecionados 43 cães. Amostras de lesões de pele e narinas foram coletadas, cultivadas, e analisadas fenotipica e genotipicamente. Em 62 amostras (91%), os microrganismos foram classificados como Staphylococcus pseudintermedius. A taxa de resistência a antibióticos variou entre 7% (amicacina; 4/62) e 77% (sulfamethoxazol + trimetoprim; 48/62). Resistência a oxacilina foi observada em 34% das amostras (21/62). Vinte e cinco amostras (37%), eram cepas portadoras do gene mecA. Correlação significativa (P<0,01) foi observada entre a presença do gene mecA e a resistência à oxacilina. Considerando os cães, 17 eram portadores de cepas com gene mecA e 8(47%) delas carreavam este gene nas amostras de lesão de pele e nas narinas. Correlação significativa (P>0,01) foi observada entre a presença do gene mecA nas lesões de pele e nas narinas. Sendo assim, resistência à oxacilina in vitro pode ser aferida com segurança para indicar a presença do gene mecA em amostras de MRSP, e as narinas podem constituir em um reservatório dos microorganismos em cães.(AU)

In vitro culture of somatic cells derived from ear tissue of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) in medium with different requirements / Cultivo in vitro de células somáticas derivadas de tecido auricular de cateto (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) em meio com diferentes requerimentos

The maintenance of metabolic activities during the in vitro culture of somatic cells of wild animals, especially collared peccary (Pecari tajacu), is an interesting step in conservation of these cells for the use in nuclear transfer. In this context, it is necessary to optimize the culture conditions of somatic cells by the establishment of appropriate supplementation to the media. Therefore, this study aimed to analyze the composition of the culture means of somatic cell derived from ear tissue of collared peccaries, evaluating concentrations of fetal bovine serum (FBS; 10% vs. 20%) and epidermal growth factor (EGF; 5ng/mL vs. 10ng/mL). Tissues were submitted to primary culture and subcultures for 40 days and cells were analyzed for morphology, adhesion, subconfluence, and proliferative activity to develop the growth curve and to determine the population doubling time (PDT), viability, and functional/metabolic activity. No difference was observed between the concentrations of FBS for several parameters, except for viability [FBS10: 85.6% vs. FBS20: 98.2%], PDT [FBS10: 155.4h vs. 77.2h], and functional/metabolic assay [FBS10: 0.57-0.55 vs. FBS20: 0.82-0.99 (D5-D7)]. For the EGF in culture, no difference was observed in the evaluated parameters. In all experiments, the growth curves were typical S-shape and the cells passed through a lag, logarithmic, and plateau phase. In conclusion, 20% FBS is suitable for the recovery of somatic cells; nevertheless, EGF does not improve the quality of growing these cells. To our knowledge, this is the first study culturing somatic cells of collared peccaries.(AU)

A manutenção das atividades metabólicas durante o cultivo in vitro de células somáticas de animais silvestres, especialmente cateto (Pecari tajacu), é uma etapa interessante na conservação dessas células para o uso na transferência nuclear. Nesse contexto, é necessário aperfeiçoar as condições de cultivo de células somáticas pelo estabelecimento de suplementações apropriadas aos meios. Portanto, este estudo objetivou analisar a composição dos meios de cultivo de células somáticas derivadas de tecido auricular de catetos, avaliando concentrações de soro fetal bovino (SFB; 10% vs. 20%) e fator de crescimento epidermal (EGF; 5 ng/mL vs. 10 ng/mL). Para tanto, tecidos foram submetidos ao cultivo primário e subcultivos por 40 dias e células foram analisadas por morfologia, adesão, subconfluência, e atividade proliferativa pelo desenvolvimento da curva de crescimento e determinação do time de duplicação da população (PDT), viabilidade, e atividade funcional/metabólica. Nenhuma diferença foi observada entre as concentrações de SFB para os vários parâmetros, exceto para viabilidade [SFB10: 85,6% vs. SFB20: 98,2%], PDT [SFB10: 155,4 h vs. 77,2 h], e atividade funcional/metabólica [SFB10: 0,57-0,55 vs. SFB20: 0,82-0,99 (D5-D7)]. Para o EGF em cultivo, nenhuma diferença foi observada nos parâmetros avaliados. Em todos os experimentos, as curvas de crescimento foram típicas de forma S e as células passaram por uma fase lag, logarítmica e platô. Em conclusão, 20% de SFB é adequado para a recuperação de células somáticas; contudo, EGF não melhora a qualidade de crescimento dessas células. Ao nosso conhecimento, este é o primeiro estudo cultivando células somáticas de catetos.(AU)

Wharton's jelly cells from sheep umbilical cord maintained with different culture media are permissive to in vitro infection by Small Ruminant Lentiviruses / Células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino mantidas em diferentes meios de cultivo são permissivas à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes

This study aimed to isolate cells from the Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) of sheep collected during natural parturition using different culture media, in addition to reporting for the first time the permissiveness of these cells to in vitro infection by small ruminant lentiviruses. Ten umbilical cords were collected from healthy sheep. Each cord explants were grown in different media consisting of MEM, low glucose DMEM, M199, and RPMI-1640. The permissiveness of infection of sheep cells from WJUC was tested with CAEV-Cork and MVV-K1514 strains, inoculating 0.1 MOI of each viral strain. Four supernatants from each strain were obtained from WJUC sheep cell cultures infected in different media. The results demonstrated the presence of cytopathic effect after the in vitro infection by CAEV-Cork and MVV-K1514 with all of the tested culture media. Nested-PCR detected proviral DNA in all supernatants. Supernatants containing CAEV-Cork viruses had TCID 50/ml titres of 10 5.5 in MEM, 10 4.0 in low glucose DMEM, 105.0 in M199, and 10 5.7 in RPMI-1640. Supernatants containing the MVV-K1514 virus had TCID 50/ml titres of 10 4.3 in MEM, 10 3.5 in low-glucose DMEM, 10 4.7 in M199, and 10 3.5 in RPMI-1640. Sheep cells from WJUC are permissive to in vitro infection by small ruminant lentivirus.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar células da geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) ovino coletado por ocasião do parto natural, utilizando-se diferentes meios de cultivo, além de relatar, pela primeira vez, sua permissividade à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes (LVPRs). Dez cordões umbilicais foram coletados de ovelhas hígidas e soronegativas para LVPRs pelo teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). De cada cordão, explantes foram cultivados em quatro meios distintos que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, meio 199 e RPMI-1640, todos acrescidos de 10% de soro fetal bovino em estufa com atmosfera úmida e 5% de CO2 a 37ºC. A permissividade de infecção das células GWCU ovino foi testada frente às cepas CAEV-Cork e MVV-K1514, inoculando-se 0,1 MOI de cada cepa viral e corando as monocamadas com May Grunwald Giemsa para visualização do efeito citopático. Foram obtidos quatro sobrenadantes CAEV-Cork e quatro MVV-K1514, provenientes do cultivo de células GWCU ovino infectadas por 21 dias em meios distintos, dos quais foram realizadas titulação em membrana sinovial caprina e extração do DNA pró-viral para realização de nested-PCR e eletroforese em gel de agarose a 2%. Os resultados demonstraram a presença de efeito citopático na infecção in vitro tanto por CAEV-Cork como por MVV-K1514 em todos os meios de cultivo, sendo visualizados sincícios e lise celular em microscópio invertido. A nested-PCR detectou o DNA pró-viral tanto do CAEV-Cork como do MVV-K1514 em todos os sobrenadantes. Os sobrenadantes contendo o vírus CAEV-Cork apresentaram títulos em TCID50/mL de 10 5,5 em MEM, 10 4,0 em DMEM baixa glicose, 10 5,0 em meio 199 e 10 5,7 em RPMI-1640. Os sobrenadantes contendo o vírus MVV-K1514 apresentaram título em TCID 50/mL de 10 4,3 em MEM, 10 3,5 em DMEM baixa glicose, 10 4,7 em meio 199 e 10 3,5 em RPMI-1640. Células GWCU ovino são permissivas à infecção in vitro pelos lentivírus de pequenos ruminantes CAEV-Cork e MVV-K1514.(AU)

Desempenho de doadoras leiteiras mestiças F1 (Gir x Holandês) no sistema de produção in vitro de embriões / Performance of dairy crossbred F1 donnors (Gir x Holstein) in the production system in vitro embryo

O Brasil atualmente é detentor do terceiro maior rebanho de vacas leiteiras do mundo, composto, em sua maioria, de animais mestiços F1 (Gir X Holandês), os quais são bem adaptados às áreas tropicais. O objetivo do presente estudo foi investigar a eficiência da ovum pick-up (OPU) e da produção in vitro de embriões oriundos de doadoras Girolando com sêmen sexado de touros provenientes de duas raças, Gir e Holandesa. Foram utilizados dados referentes a 232 animais de diversos rebanhos, totalizando 4334 oócitos recuperados. Os oócitos foram classificados, e as estruturas viáveis (GI, GII e GIII) foram utilizadas para produção in vitro de embriões (PIVE). Foi observada uma média de oócitos recuperados para as doadoras F1 de 18,14±1,33. Além disso, notou-se que não houve diferença entre os dois cruzamentos utilizados, considerando média de total de embriões (4,96±0,40 e 6,56±0,76) para o cruzamento F1 X HPB (Holandês preto e branco) e F1 X Gir, respectivamente. Portanto, as doadoras F1 apresentaram potencial como doadoras de oócitos no sistema de produção in vitro de embriões, independentemente da raça do touro cujo sêmen foi utilizado.(AU)

Brazil currently has the third largest herd of dairy cattle in the world, composed mainly by F1 crossbreed animals (Gyr x Holstein), which are well adapted to tropical areas. The aim of this study was to evaluate the efficiency of Girolando donors in OPU and in vitro production of embryos (IVEP) using sexed semen of bulls from two breeds, Gyr and Holstein. We used data from 232 animals coming from different herds and the total of recovered oocytes was 4334. The oocytes were classified according to their viability and the viable ones (GI, GII and GIII) were used for IVP. The average of oocyte recovery from F1 donors was 18.14±1.33. There was no difference on the average of embryos considering the crossing F1 X Holstein (4.96±0.40) and F1 X Gyr (6.56±0.76). In conclusion, F1 donors showed a potential for being oocyte donors in the system of in vitro production of embryos, regardless the breed of the bull.(AU)

Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45 / Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody

O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.

Técnica de fatiamento do ovário para obtenção de oócitos em cutias (Dasyprocta prymnolopha) / Ovarian slicing technique to obtain oocytes from agoutis (Dasyprocta prymnolopha)

As biotécnicas da reprodução são importantes ferramentas para conservação de espécies domésticas e silvestres, pois permitem a recuperação e uso futuro de material reprodutivo. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros morfológicos de CCOs de cutias, obtidos pela técnica de fatiamento do ovário para utilização em protocolos de maturação e fecundação na produção in vitro de embriões. Foram utilizadas dezessete cutias fêmeas do NEPAS, CCA- UFPI, com idade e peso médios de 3,9 anos e 2,16Kg, respectivamente, que foram submetidas à ovariossalpingohisterectomia. Os ovários após dissecados e pesados em balança de precisão, foram fatiados individualmente. Procedeu-se a busca e seleção dos CCOs em estereomicroscópio, os quais foram identificados e quantificados por cada ovário, além de classificados quanto a sua morfologia segundo a quantidade de camadas de células do cumulus e ao citoplasma em quatro graus. Verificou-se que a técnica de fatiamento do ovário possibilitou a obtenção de CCOs de cutias, com recuperação de grande quantidade e de variados graus de qualidade. Não houve correlações entre a idade dos animais e o peso dos ovários; a idade e o número de CCOs obtidos; entre o peso das cutias e o peso dos ovários e o número de CCOs obtidos.

The reproductive biotechnologies are important tools for conservation of domestic and wild animal species, because they allow the recovery and future use of reproductive material. The aim of this study was to evaluate morphological parameters of COCs of agoutis obtained by slicing the ovary for using them in maturation and fertilization protocols in vitro production of embryos. Seventeen female agoutis NEPAS, CCA-UFPI, age and weight average of 3.9 years and 2.16 kg, respectively, were underwent ovariossalpingohisterectomy. The ovaries after dissected and weighed on a precision balance were sliced individually. We proceeded the search and selection of COCs in stereomicroscope, which were identified and quantified by each ovary, and classified as to their morphology, by the quantity of layers of cumulus cells and the cytoplasm into four degrees. It has been found that the technique of slicing ovarian possible to obtain agouti COCs with recovery of loads and varying degrees of quality. There was no correlation between age and weight of animal ovaries, age and the number of COCs obtained; between the weight of agoutis and weight of ovaries and the number of COCs obtained.

Espectros luminosos no desenvolvimento de plântulas de Curcuma longa cultivadas in vitro / Luminous spectrum in the development of in-vitro Curcuma longa seedlings / Espectros luminosos en el desarrollo de plántulas de Curcuma longa cultivadas in vitro

Curcuma longa é uma espécie asiática perene e rizomatosa com grandes propriedades medicinais, alimentícias e ornamentais. No processo micropropagativo carece de muitas informações dentre a faixa espectral mais adequada ao seu desenvolvimento. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar diferentes filmes espectrais no desenvolvimento de plântulas de C. longa cultivadas in vitro. Para tanto, brotações de C. longa foram inoculadas em meio Murashig e Skoog e suplementado com 30 g/L de sacarose, 6,5 g/L de ágar 4, 44 µM/L de Benzil aminopurina (BAP) e 1,08 µM/L ácido naftaleno acético (ANA). O pH do meio foi ajustado para 5,8. Os brotos foram submetidos a diferentes intensidades e qualidade espectral de luz: branco, vermelho, amarelo, azul e verde. As plântulas foram mantidas em sala de crescimento em luz constante de 25C° e fotoperíodo de 24 horas por 145 dias. Foram avaliadas características morfológicas e anatômicas. Os resultados obtidos demonstraram que as diferenças espectraris propiciaram diferenças no desenvolvimento das plântulas de C. longa e também na contaminação in vitro. O diâmetro da base das plântulas, a massa seca e fresca da parte área e raiz foram influenciadas pelas diferentes faixas espectrais, sendo que de modo geral os filmes, amarelo e branco foram os que propiciaram maiores valores para essas características. Já o filme verde foi o que menos favoreceu o ganho de massa das plântulas, além disso, alta taxa de contaminação foi observada na presença desse filme.

Curcuma longa is a perennial Asiatic rhizomelic species with important medicinal, food and ornamental properties. However, its micro-propagation process lacks information regarding the most adequate spectral range for its development. Thus, this work aimed to evaluate different spectrum films in the development of in vitro C. longa seedlings. In order to do this, C. longa sprouts were inoculated in Murashig and Skoog media supplemented with 30 g/L of sucrose, 6.5 g/L of agar 4, 44 µM/L of benzylaminopurine (BAP) and 1.08 µM/L naphthalene acetic acid (ANA). The pH was adjusted to 5.8. Sprouts were put under different light spectrum intensity and quality: white, red, yellow, blue and green. The seedlings were maintained in a growth room with constant light at 25 ºC and a 24-hours photoperiod for 145 days. Morphological and anatomical characteristics were analyzed. The results demonstrated that spectral differences propitiated differences in the development of C. longa seedlings, and also in the in vitro contamination. The seedling base diameter, aerial and root dry and fresh mass were influenced by the different spectral ranges, with the yellow and white ranges being those that resulting the highest values for each characteristic. The green spectrum was the least favorable for the seedling regarding mass gain, as well as presenting the highest contamination rate.

Curcuma longa es una especie rizomélica asiática perenne con grandes propiedades medicinales, alimenticias y ornamentales. En el proceso de micropropagación no se dispone de informaciones sobre el rango espectral más adecuado para su desarrollo. Así, el objetivo de ese trabajo fue evaluar distintos espectros en el desarrollo de plántulas de C. longa cultivadas in vitro. Para esto, se inocularon los brotes de C. longa en medio Murashig y Skoog suplementados con 30 g/L de sacarosa, 6,5 g/L de agar 4, 44 µM/L de Benzilaminopurina (BAP) y 1,08 µM/L de ácido naftaleno acético (ANA). El pH de lo medio fue ajustado para 5.8. Los brotes fueron sometidos a diferentes intensidades y calidad de espectro luz: blanco, rojo, amarillo, azul y verde. Las plántulas se mantuvieron en un salón de crecimiento con luz constante a 25ºC y fotoperiodo de 24 horas durante 145 días. Se evaluaron características morfológicas y anatómicas. Los resultados obtenidos demostraron que las diferencias espectrales propiciaron diferencias en el desarrollo de plántulas de C. longa y sobre la contaminación in vitro. El diámetro de la base de las plántulas, la masa seca y fresca de la parte aérea y raíces fueron influenciadas por los diferentes rangos espectrales, siendo que el amarillo y el blanco fueron los que propiciaron valores más altos para esas características. La película verde fue la menos favorable a la plántula en gano de masa, además, alta tasa de contaminación se ha observado en la presencia de esa película.

Efetividade de dentifrícios clareadores sobre esmalte de dentes bovinos / Effectiveness of whitening dentifrices on bovine teeth enamel

Introdução: devido à insatisfação relatada pelos pacientes com a coloração dos dentes e a busca por procedimentos que envolvam estética do sorriso associado com o desenvolvimento de técnicas e materiais amplamente propagados na mídia, as empresas responderam com a oferta no mercado de uma variedade de opções de dentifrícios que propõem efeito clareador prático e rápido. Objetivo: avaliar a efetividade de dentífricos clareadores em diferentes formas de apresentação sobre esmalte de dentes bovinos. Material e Métodos: quinze dentes bovinos foram imersos diariamente por um período de 1 hora em refrigerante a base de cola e em seguida foram divididos equitativamente em três grupos, onde cada grupo foi escovado com um dentifrício especifico por 2 minutos. O grupo A foi escovado com dentifrício Colgate Luminous White (Colgate ­ Palmolive), em forma de pasta, o grupo B com dentifrício Closeup Diamond Attraction Delicate White (Unilever) em forma de gel e o grupo C com dentifrício Oral-B Complete (Procter & Gamble) em forma de pasta. Resultados: as diferentes formas de apresentação estudadas foram efetivas na remoção das manchas extrínsecas em dentes bovinos; O dentifrício Colgate Luminous White na forma de apresentação pasta clareador apresentou-se mais efetivo na remoção das manchas extrínsecas; O dentifrício Oral ­ B Complete na forma de pasta foi efetivo, porém em menor intensidade em comparação aos dentifrícios clareadores estudados. Conclusão: as diferentes formas de apresentação dos dentifrícios utilizados foram efetivas na remoção de manchas extrínsecas.

Introduction: due to dissatisfaction reported by patients with tooth staining and the search for procedures involving smile aesthetics associated with the development of techniques and materials widespread on social medias, companies responded by offering to the market a variety of toothpaste choices in order to provide practical and fast bleaching effects. However, these dentifrices appear to have a limited efficiency since they only contain abrasives for the removing of extrinsic tooth stain. Objective: his research aimed to assess the effectiveness of different forms of presentation of bleaching agents on bovine teeth enamel. Methods: daily, fifteen bovine teeth were immersed in cola soft drink for a period of 1 hour and then they were divided into three groups (each group containing five bovine teeth). Each group was brushed with a specific dentifrice for 2 minutes: the group A was brushed with Colgate Luminous White in paste form (Colgate ­ Palmolive); the Group B with Diamond Closeup Attraction Delicate White in gel form (Unilever), and the group C with Oral-B complete in paste form (Procter & Gamble). Results: color change was observed through photographs and analysis of the interpreted samples based on the theoretical background. Conclusion: the dentifrices used were able to remove extrinsic stains and the bleaching dentifrice Colgate Luminous White was more effective as a result in this connection.

Bovine conceptus of Bos indicus produced by somatic cell nuclear transfer and parthenogenesis present morphological variations since the blastocyst stage / Conceptos bovinos (Bos indicus) produzidos por transferência nuclear de células somáticas e partenogênese apresentam variações morfológicas desde o estágio de blastocisto

In cattle, embryo development is characterized by the appearance of two distinct cell layers, the trophectoderm and the inner cell mass. The latter will undergo differentiation to form the embryonic disc consisting of the epiblast and hypoblast. The aim of this study was to ultrastructurally characterize the bovine embryo from different in vitro production techniques, with emphasis on trophectoderm and inner cell mass cells. Bovine embryos on day 7 (conception = D1) of pregnancy, derived via in vitro production techniques, were fixed for light and transmission electron microscopy processing. Results suggested that embryos produced by nuclear transfer of somatic cells and parthenogenesis showed significant changes in macroscopic and microscopic structure. Size was reduced, and the inner cell mass had no defined shape. Furthermore, organelles responsible for the absorption processes, communication, growth, and cellular metabolism were fewer and had changes in shape, when compared to results in embryos produced by in vitrofertilization. We concluded that embryos produced by parthenogenesis and SCNT exhibit morphological differences when compared with IVF embryos, such as undeveloped blastocoel, poorly defined distribution of ICM, and morphological differences in organelles.

Em bovinos, o desenvolvimento embrionário é caracterizado pelo surgimento de duas camadas distintas, o trofectoderma e a massa celular interna. Este último irá sofrer diferenciação para formar o disco embrionário, o qual consiste em epiblasto e hipoblasto. O objetivo deste estudo foi caracterizar ultraestruturalmente o embrião bovino proveniente de diferentes técnicas de produção in vitro, com ênfase no trofectoderma e na massa celular interna. Embriões bovinos com sete dias de gestação (fecundação = D1), derivados de técnicas de produção in vitro, foram fixados para processamento de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Os resultados sugerem que os embriões produzidos por transferência nuclear de células somáticas e partenogênese apresentaram alterações significativas em suas estruturas macro e microscópica. O tamanho foi reduzido, e a massa celular interna não tinha uma forma definida. Além disso, organelas responsáveis por processos de absorção, comunicação, crescimento e metabolismo celular estavam em menor número e tinham alterações na forma quando comparadas aos resultados em embriões produzidos por fertilização in vitro. Conclui-se que os embriões produzidos por SCNT e partenogênese apresentam diferenças morfológicas quando comparados aos embriões de fertilização in vitro, tais como blastocele pouco desenvolvida, massa celular interna pouco definida e diferenças morfológicas nas organelas.

Supplementation of fetal bovine serum alters histone modification H3R26me2 during preimplantation development of in vitro produced bovine embryos / Suplementação com soro fetal bovino altera a modificação de histona H3R26me2 durante o período pré-implantacional em embriões bovinos produzidos in vitro

In vitro production (IVP) of bovine embryos is not only of great economic importance to the cattle industry, but is also an important model for studying embryo development. The aim of this study was to evaluate the histone modification, H3R26me2 during pre-implantation development of IVP bovine embryos cultured with or without serum supplementation and how these in vitro treatments compared to in vivo embryos at the morula stage. After in vitro maturation and fertilization, bovine embryos were cultured with either 0 or 2.5% fetal bovine serum (FBS). Development was evaluated and embryos were collected and fixed at different stages during development (2-, 4-, 8-, 16-cell, morula and blastocyst). Fixed embryos were then used for immunofluorescence utilizing an antibody for H3R26me2. Images of stained embryos were analyzed as a percentage of total DNA. Embryos cultured with 2.5% FBS developed to blastocysts at a greater rate than 0%FBS groups (34.85±5.43% vs. 23.38±2.93%; P<0.05). Levels of H3R26me2 changed for both groups over development. In the 0%FBS group, the greatest amount of H3R26me2 staining was at the 4-cell (P<0.05), 16-cell (P<0.05) and morula (P<0.05) stages. In the 2.5%FBS group, only 4-cell stage embryos were significantly higher than all other stages (P<0.01). Morula stage in vivo embryos had similar levels as the 0%FBS group, and both were significantly higher than the 2.5%FBS group. These results suggest that the histone modification H3R26me2 is regulated during development of pre-implantation bovine embryos, and that culture conditions greatly alter this regulation...

A produção in vitro (PIV) de embriões de bovinos não é apenas de grande importância econômica para a pecuária, mas é também um importante modelo para estudar o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a modificação de histona, H3R26me2 durante o desenvolvimento pré-implantacional em embriões bovinos produzidos in vitro, cultivados com ou sem suplementação de soro fetal bovino (SFB), bem como comparar essa modificação específica entre mórulas produzidas in vitro e in vivo. Após a maturação in vitro e fertilização, embriões foram cultivados com suplementação de 0 ou 2,5% SFB. O desenvolvimento embrionário foi avaliado e embriões foram coletados e fixados em diferentes fases durante o desenvolvimento (2, 4, 8 e 16 células, mórula e blastocisto). Os embriões fixados foram avaliados por imunofluorescência utilizando um anticorpo para H3R26me2. Imagens de embriões corados foram analisadas baseadas na porcentagem do DNA total. Embriões cultivados com 2,5% SFB tiveram uma taxa de desenvolvimento ao estágio de blastocisto maior que o grupo que não recebeu suplementação com SFB (34.85±5,43% vs 23.38±,93%; P<0,05). Níveis de H3R26me2 variaram para ambos os grupos ao longo do desenvolvimento. No grupo 0% SFB, a marcação para H3R26me2 foi mais intensa nos estágios de 4 células (P<0,05), 16 células (P<0,05) e mórula (P<0.05). No grupo 2.5% SFB, apenas os embriões de 4 células tiveram marcação significativamente maior que todas as outras fases (P<0,01). Mórulas produzidas in vivo apresentaram níveis de H3R26me2 semelhantes ao grupo 0% SFB, e ambos foram significativamente maiores que o grupo 2.5% SFB. Estes resultados sugerem que a modificação de histona H3R26me2 é regulada durante o desenvolvimento pré-implantacional de embriões bovinos, e que as condições de cultura alteram de maneira importante esta regulação...

Eficácia de Chenopodium ambrosioides (erva-de-santa-maria) no controle de endoparasitos de Coturnix japônica (codorna japonesa) / Effectiveness of Chenopodium ambrosioides (santa maria herb) for controlling Coturnix japonica (japanese quail) endoparasites

O objetivo foi testar in vitro e in vivo a eficácia da planta medicinal Chenopodium ambrosioidesLinnaeus, 1786 (erva-de-santa-maria), nas formas fitoterápica e homeopática, como meios alternativos para o controle de endoparasitos de Coturnix japonica Temminck & Schlegel, 1849 (codorna japonesa), um sério problema que afeta a criação e desempenho de aves domésticas, ocasionando morte quando muito intenso, retardo de crescimento, redução de índice de conversão alimentar e aumento na suscetibilidade às doenças infecciosas. As metodologias utilizadas foram preconizadas por Coles et al. (1992), creditada pela World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP). A pesquisa evidenciou a presença dos gêneros Ascaridiae Eimeria. O ensaio in vitro demonstrou alta taxa de redução na inibição de eclosão de ovos de Ascaridiasp. (100,00%) e significativa taxa de redução na destruição de oocistos de Eimeriasp. (47,06%). O ensaio in vivodemonstrou alta taxa de redução na contagem de ovos de Ascaridiasp. nas fezes (100,00%) e expressiva taxa de redução na contagem de oocistos de Eimeriasp. nas fezes (60,33%). Chenopodium ambrosioides mostrou em certos momentos superioridade frente ao produto tradicional (Thiabendazole/Mebendazole) e índices superiores aos preconizados pelo Ministério da Agricultura do Brasil e Organização Mundial da Saúde como indicativos de eficácia.

The aim was in vitro and in vivo to test the effectiveness of Chenopodium ambrosioides Linnaeus, 1786 (santa maria herb) medicinal plant, in regard to phytotherapeutic and homeopathic forms as alternative methods to control Coturnix japonica Temminck & Schlegel, 1849 (japanese quail) endoparasites. The parasitosis is a serious problem affecting domestic poultry raising and performance causing death, delay in grow, food conversion rate reduction and increase of susceptibility to infectious diseases. Methodologies were advocated by Coles et al. (1992), corroborated by World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP). Presence of the genera Ascaridia and Eimeria was displayed by this survey. In vitro essay demonstrated high reduction rate on eggs eclosion inhibition of Ascaridia sp. (100.00%) and significant reduction rate on oocyst destruction of Eimeria sp. (47.06%). In vivo essay demonstrated high fecal egg counting reduction rate of Ascaridia sp. (100.00%) and expressive fecal oocyst counting reduction rate of Eimeriasp. (60.33%). C. ambrosioides showed upper rates front traditional product (Thiabendalol/Mebendazol) as well as to those ones advocated by the Brazilian Ministry of Agriculturel and the World Health Organization as effectiveness indicative.